潔凈室懸浮微生物檢測方法和要求如下：
1. 懸浮微生物的采樣裝置有以下兩類：
（1）采用無源采樣裝置，如培養皿。
（2） 采用有源采樣裝置，如撞擊采樣器、離心采樣器、過濾采樣器。
2. 空氣潔凈環境中懸浮微生物的靜態或空態檢測前，應對各類表面進行擦拭消毒，但不得對室內空氣進行熏蒸、噴灑之類的消毒。動態檢測均不得對表面和空氣進行消毒。
3. 沉降菌檢測應符合下列要求：
（1） 使用直徑90mm（Φ90）的培養皿采樣。當采用其他直徑培養皿時，應使其總面積和90皿總面積相當。
（2） 培養皿中灌注胰蛋白酶大豆瓊脂培養基，必須留樣作陰性對照。
（3） 培養皿表面應經適當消毒清潔處理后，布置在有代表性的地點和氣流擾動極小的地點。在亂流潔凈室內培養皿不應布置在送風口正下方。
（4） 當用戶沒有特定要求時，培養皿應布置在地面及其以上0.8m之內的任意高度。
（5） 每一間潔凈室或每一個控制區應設1個陰性對照皿。
（6） 動態監測時也可協商布點位置和高度。
（7） 培養皿數應不少于微粒計數濃度的測點數，如工藝無特殊要求應大于等于表1中的最少培養皿數，另外各加1個對照皿。
表1 最少培養皿數
潔凈度級別 | 所需Φ90培養皿數（以沉降0.5h計） |
高于5級 | 44 |
5級 | 13 |
6級 | 4 |
7級 | 3 |
8級 | 2 |
9級 | 2 |
（8） 當延長沉降時間時，可按比例減少最少培養皿數，為防止脫水，最長沉降時間不宜超過1h，當所需沉降時間超過1h，可重疊多皿連續采樣。除非經過驗證，證明更長的沉降時間可以基本按比例增加菌落數。
（9） 培養皿應從內向外布置，從外向內收皿。
（10） 每布置完1個皿，皿蓋只允許斜放在皿邊上，對照皿蓋挪開即蓋上。
（11） 布皿前和收皿后，均應用雙層包裝保護培養皿，以防污染。
（12） 收皿后皿應倒置擺放，并應及時放入培養箱培養，在培養箱外時間不宜超過2h。如無專業標準規定，對于檢測細菌總數，培養溫度采用（35～37）℃，培養時間為（24～48）h；對于檢測真菌，培養溫度（27～29）℃，培養時間3d。
（13） 布皿和收皿的檢測員必須穿無菌服，但不得穿大褂。頭、手均不得裸露，褲管應塞在襪套內，并不得穿拖鞋。
（14） 對培養后的皿上菌落計數時，應采用5～10倍放大鏡查看，若有2個或更多的菌落重疊，可分辨時則以2個或多個菌落計數。
（15） 當單皿菌落數太大受到質疑時，可按以下原則之一進行處理：
1）作為壞點剔除；
2）重測，如結果仍大，以兩次平均值為準；如結果很小，可再重測；
3）重測該處微粒濃度，參考此結果作出判斷。
所有上述處理方法均應記錄在案。
（16） 每皿平均菌落數取到小數點后1位。
（17） 動態監測時每點疊放多個平皿或采用可自動切換的儀器，每點應采滿4h以上，每皿可采30min。當只放1個皿時，可少于4h，但不可少于1h。
4. 浮游菌采樣應符合下列要求：
（1） 使用單級或多級撞擊式采樣器、離心采樣器或過濾采樣器，采樣必須按所用儀器說明書的步驟進行，特別要注意檢測之前對儀器消毒滅菌，并對培養皿或培養基條做陰性對照。
（2） 采樣點數應不少于微粒計數濃度測點數。
（3） 采樣點應在離地0.8m高平面上均勻布置，或經委托方（用戶）與檢測方協商確定。亂流潔凈室內不得在送風口正下方布點。靜態或空態檢測前對室內各種表面應作擦拭消毒。
（4） 每點采樣1次，如工藝無特殊要求，每次采樣量應大于等于表2推薦的浮游菌最小采樣量。
表2 浮游菌最小采樣量
潔凈度級別 | 最小采樣量（L） |
5級和高于5級 | 1000 |
6級 | 300 |
7級 | 200 |
8級 | 100 |
9級 | 100 |
每次采樣時間不宜超過15min，不應超過30min。
當潔凈度很高，或預期含菌濃度可能很低時，采樣量應大于最小采樣量多，以滿足減少計數誤差的要求。
（5） 采樣器應用支架固定，采樣時檢測人員應退出，手持離心式采樣器除外。檢測人員的穿戴同本附錄3條第15款。
必須手持采樣器時，應將手臂伸直，站于下風向。
（6） 采樣后宜在2h之內將采樣器中的培養皿或培養基條送入培養箱中培養。
（7） 每點平均值取到小數點后1位。
（8） 動態監測的測點位置、數量和高度由工藝并經協商確定。每間潔凈室或每一個獨立受控環境中各點總采樣量，不分級別，均應大于1m3。每點可用多臺采樣器。
（9） 單點菌落數太大時，應按附錄3條第15款的原則處理。
5. 表面染菌密度檢測應符合下列要求：
（1） 對于潔凈室內圍護結構、設備等表面的微生物采樣，應采用無菌棉拭子擦抹法，當表面很大，硬且平時，也可采用接觸皿法。
（2） 用規格板標定出面積為25c㎡的區塊，對于圍護結構，每面結構不少于4塊，對于設備，每件不少于2塊，取樣地點均協商確定。
（3） 將無菌棉拭于含10mL稀釋液試管中浸濕，于管壁上擠干后，對一區塊擦抹采樣，橫豎往返8次。每一區塊使用1根無菌棉拭。采樣后，以無菌操作方式將棉拭采樣端剪入原稀釋液試管中，經電動混勻器震蕩20s或在手掌振打200次。
（4） 取含菌液體1.0mL，以瓊脂灌注法接種平皿，每個樣本接種2個平皿，于（35～37）℃培養箱中培養（24～48）h后計數。
（5） 必須將本次檢測所用的稀釋液、棉拭子、培養基等留樣作陰性比照。
（6） 具體事項遵照衛生部《消毒技術規范》執行。
（7） 對于適用接觸皿采樣的表面，以無菌操作方式，先將培養基注入硬質或軟質Φ55平皿，使培養基表面高出培養皿周邊，測試時，將培養皿倒過來，使培養基表面均勻牢固地按壓住整個區域5s，不得有環形或線性的運動。
（8） 對于圍護結構，每面結構應用不少于4個培養皿按壓，對于設備，每件用不少于2個培養皿按壓。
（9） 按壓取樣后的培養皿，應在2h之內，于（35～37）℃培養箱中培養（24～48）h后計數。
（10） 菌數平均數取到小數點后1位。
6. 室內浮游菌濃度和沉降菌濃度應按上面方法進行檢驗，各點平均值或一點最大值應符合設計或相關標準的要求。
